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3分鐘教你如何選購合適的梯度PCR儀
發布時間:2020-04-27   點擊次數:888次
   梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。PCR反應能否成功,退火溫度是關鍵,它每個孔的溫度可以在范圍內按照梯度設置,根據結果,一步就可以摸索出適反應條件。一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)的稱之為梯度PCR儀。因為被擴增的不同的DNA片段其適合的退火溫度不同,通過設置一系列的梯度退火溫度進行擴增,從而一次性PCR擴增就可以篩選出表達量高的適合退火溫度進行有效的擴增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴增,這樣可節省試驗時間、提高實驗效率,又節約實驗成本。在不設置梯度的情況下亦可當做普通的PCR用。

  PCR技術是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,它可看作是生物體外的特殊DNA復制,目前市場上常見的有:普通PCR儀、梯度PCR儀、原位PCR儀、熒光定量PCR儀(qPCR)以及數字PCR儀(dPCR)等。而使用多是梯度PCR儀和熒光定量PCR儀,生產PCR儀廠家也是不勝枚舉。
 

  小編將就如何選購一臺合適的梯度PCR儀作以下介紹,供大家參考。

  精準的溫度控制系統

  對PCR儀來說,溫度控制指標主要是指溫度的準確性、均一性、以及升降溫速度。

  溫度的準確性:是指樣品孔溫度與設定溫度的一致性,它直接關系到實驗的成敗。由于PCR是一個幾何級數擴增的過程,不論是變性、退火還是延伸都需要準確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要,有時1°甚0.5°的差異也能決定實驗的成功與失敗,所謂差之毫厘,謬之千里。因而對PCR擴增儀而言溫度控制就意味著質量。

  溫度的均一性:是指樣品孔間的溫度差異,它關系到在不同樣品孔進行反應結果的一致性。有用戶發現用同樣的樣品,同樣的PCR反應程序,后的結果竟然差異非常明顯,或許就是因為不同位置的溫度不均勻所致。同時位置邊緣效應對PCR實驗可重復性影響非常明顯。

  升降溫速率:更快的升降溫速度,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間,能提高PCR反應的特異性。2.2 儀器的功能性和人性化設計,越友好的操作界面、完善的功能以及人性化的設計更能吸引用戶。(熱蓋、樣品座、軟件)

  熱蓋:現在的PCR儀一般均配備熱蓋,熱蓋溫度設為105℃,使樣品管頂部的溫度達到105℃左右,蒸發的反應液就不會產生凝集在管蓋上而改變反應體積,這樣用戶就無需再向反應管內加石蠟油,直接減少后繼反應的麻煩。

  樣品座:PCR反應多在0.2或者0.5的管子中進行,多數PCR儀也配備了不同的可更換樣品槽適配不同的樣品管。

  軟件:新的PCR儀都比較注重程序編寫的簡易性。大屏幕,顯示實時信息,倒計時,記憶存儲多個程序、自動斷電保護等都有助于實驗室中的復雜環境使用。

  隨著生物技術的發展,PCR儀已經發展為實驗室通用儀器,因此生產廠家也是如雨后春筍般層出不窮,光是比較參數,就夠累了。況且PCR儀還是實驗室中的老黃牛,幾乎24小時運轉,買臺可靠的儀器尤為重要。

  建議在選購PCR儀時,除溫度、功能、人性化設計外,還需要注意價格、使用壽命、售后服務、機器噪音、品牌的度等。

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