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怎樣鑒定酶標儀的性能?
發布時間:2020-03-26   點擊次數:995次
   近年來,酶標儀在臨床實驗室中的應用越來越普及,使得酶免疫分析法(EIA)的自動化程度及精確性愈來愈高,尤其是近幾年,進口的、國產的單、多通道全自動酶標儀的種類及型號發展非常迅猛,是臨床實驗室自動化程度繼生化分析儀、血細胞計數儀、血凝儀等之后的又一次更新和提高。然而,國內外有關酶標儀性能系統評價的方法甚少,有的評價指標簡單且不全面,有的對其性能評價所采用的方法不盡一致,導致不同儀器之間、廠家與用戶之間、用戶與用戶之間的評價指標缺乏可比性,這是由于酶標儀在制造工藝(多通道檢測器)、測定原理(垂直光路光度測定法)與其它水平光路光度測定的儀器(721分光光度計)之間存在著很大的差別。因此,我們對國內外幾個不同廠家和型號的儀器經過系統研究論證,初步建立了一套較為完善的酶標儀性能評價指標與鑒定的基本方法。經初步應用,效果滿意,應廣大讀者和用戶的要求,擬將酶標儀性能評價與鑒定方法的理論及其原理作一介紹和補充,以供同行在評價、鑒定和使用儀器時參考,從而為進一步提高檢測結果的室內重復性和室間可比性提供可靠的保證。


  方法:

  一.濾光片波長精度檢查及其峰值測定

  方法及其衡量的標準:用高精度紫外可見分光光度計(波長精度±0.3nm)對不同波長的濾光片進行光譜掃描,檢測值與標定值之差即為濾光片波長精度,其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質量越好,波長精度越高。

  二.靈敏度和準確度的監測

  方法:①靈敏度:精確配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解),加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中,以0.05mo1/L硫酸溶液作空白,于450nm(參比波長650nm)測定,其吸光度應≥0.01A。②準確度:準確配制:1mmo/L對硝基苯酚(提純品)水溶液,然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之,加入200ul稀釋液于小孔杯中,以10mmo1/LNaOH溶液作空白,于405nm(參比波長650nm)檢測,其吸光度應在0.4A(0.395~0.408A)左右。

  三.通道差與孔間差檢測

  方法及其表達方式:①通道差檢測:取一只酶標板小孔杯(杯底須光滑、透明、無劃痕、無污染)以酶標板架作載體,分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個通道的相應位置,蒸餾水調零,采用雙波長(測定波長490nm,參比波長630或650nm,以下均相同)連續測三次,觀察其不同通道之間測量結果的一致性可用極差值來表示其通道差。②孔間差的測量:選擇同一廠家、同一批號酶標板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調0.065~0.070A)先后置于同一通道,蒸餾水調零,采用雙波長檢測,其誤差大小用±1.96s衡量。

  四.零點飄移

  方法:取八只小孔杯,分別置于八個通道的相應位置,均加入200ul蒸餾水并調零,采用雙波長或單波長(490nm)每隔30min測定一次,觀察8個通道4h內的吸光度變化。其與零點的差值即為零點飄移。

  五.精密度評價

  方法及評價指標:每個通道三只小杯,分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液,蒸餾水調零,采用雙波長作雙份平行測定,每日測定兩次,連續測定20天。分別計算其批內精密度、日內批間精密度、日間精密度和總精密度及相應的CV值。

  六.線性測定

  方法:精確稱取甲基橙配制5個系列濃度的溶液,采用雙波長平行檢測8次求其均值。計算回歸方程、相關系數r及標準估計誤差Sy,x,并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測量范圍。

  七.雙波長評價

  方法:在運用酶標儀檢測樣品時,由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等,這些都是儀器測定過程中常見的干擾因素,而標本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對測定結果影響則較小,因此我們將文獻中的雙被長評價方法改為:取同一廠、同一批號酶標板條(每個通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調0.065~0.070A)先后于8個通道分別采用單波長(490nm)和雙波長(測定波長490nm、參比波長630/650nm)進行檢測,計算單波長和雙波長測定結果的均值、離散度,比較各組之間是否具有統計學差異以考察雙波長清除干擾因素的效果。

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